ikasi secara Kromatografi Lapis Tipis <281>.
tahap gerak Campuran metanol P-kloroform P (85:15)
Larutan uji Serbukkan beberapa tablet, tambahkan
metanol P secukupnya sampai diperoleh larutan yang
mengandung setara dengan lebih kurang 2,5 mg
eritromisin per ml.
Larutan baku Larutkan Eritromisin BPFI dalam
metanol P sampai kadar 2,5 mg per ml.
procedure Totolkan secara terpisah masing-masing
10 μl Larutan uji dan Larutan baku pada lempeng
kromatografi Silika gel P setebal 0,25 mm. Masukkan
lempeng ke dalam bejana kromatografi tanpa lapisan
kertas saring yang berisi tahap gerak, biarkan merambat
lebih kurang 7 cm dari garis penotolan. Angkat lempeng,
biarkan menguap dan semprot lempeng dengan
campuran etanol P-4-metoksi-benzaldehida P-asam
sulfat P (90:5:5). Panaskan lempeng pada 100o selama
10 menit dan amati kromatogram eritromisin yang
tampak sebagai bercak hitam sampai ungu: harga Rf
bercak utama yang diperoleh dari Larutan uji sesuai
dengan yang diperoleh dari Larutan baku.
Disolusi <1231>
Media: 900 ml Dapar fosfat 0,05 M pH 6,8.
Alat tipe 2: 50 rpm.
Waktu: 60 menit.
Larutan uji Jika perlu, encerkan beberapa alikuot
dengan Media Disolusi sampai diperoleh kadar lebih
kurang 0,28 mg eritromisin per ml.
Larutan baku Timbang saksama beberapa Eritromisin
BPFI, larutkan dalam metanol P (tidak lebih dari 1 ml
metanol untuk tiap 14 mg Eritromisin BPFI) dan
encerkan dengan air sampai kadar larutan lebih kurang
0,56 mg per ml. Segera sebelum dipakai encerkan
larutan ini dengan air sampai kadar lebih kurang 0,28 mg
per ml.
procedure Masukkan masing-masing 5,0 ml Larutan
uji dan Larutan baku ke dalam labu tentukur 25-ml,
tambahkan masing-masing 2,0 ml air, biarkan selama
5 menit sambil sesekali digoyang. Tambahkan 15,0 ml
natrium hidroksida 0,25 N, encerkan dengan Media
disolusi sampai tanda. Panaskan pada suhu 60o selama
5 menit, biarkan dingin. Lakukan penetapan jumlah
C37H67NO13 dengan mengukur serapan Larutan uji dan
Larutan baku pada panjang gelombang serapan
- 386 -
maksimum lebih kurang 236 nm memakai larutan
blangko yang dibuat dengan cara yang sama kecuali
2,0 ml air diganti dengan 2,0 ml asam sulfat 0,5 N.
Toleransi Dalam waktu 60 menit harus larut tidak
kurang dari 70% (Q) C37H67NO13, dari jumlah yang
tertera pada etiket.
Keseragaman sediaan <911> Memenuhi syarat.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 5,0%;
lakukan pengeringan dalam botol bersumbat kapiler,
dalam hampa udara pada suhu 60o selama 3 jam
memakai lebih kurang 100 mg serbuk tablet.
Penetapan potensi Masukkan tidak kurang dari 4 tablet
ke dalam blender berkecepatan tinggi berisi 200 ml
metanol P, dan campur selama 3 menit. Tambahkan
300 ml Dapar nomor 3 dan campur selama 3 menit.
Lakukan penetapan seperti tertera pada Penetapan
Potensi Antibiotik secara Mikrobiologi <131>,
memakai beberapa volume larutan yang diukur
saksama, encerkan bertahap Dapar nomor 3 sampai
diperoleh larutan uji dengan kadar yang diperkirakan
sama dengan aras dosis tengah larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
ERITROMISIN ETILSUKSINAT
Erythromycin Ethylsuccinate
H
O
O
CH3
CH3 H OH
H H3C H3C
CH3H
O
H
HH
HO
H
OCH2CH3
H3C
HO
O
CH3
OH
CH3
OCH3
O
O
OOCCH2CH2COOC2H5
CH3
N(CH3)2
Eritromisin 2’-(etilsuksinat) [41342-53-4; 1264-62-6]
C43H75NO16 BM 862,06
Eritromisin Etilsuksinat memiliki potensi setara
dengan tidak kurang dari 765 μg Eritromisin,
C43H75NO16, per mg, dihitung terhadap zat anhidrat.
Pemerian Serbuk hablur; putih atau sedikit kuning;
tidak berbau atau praktis tidak berbau; praktis tidak
berasa.
Kelarutan Sangat sukar larut dalam air; mudah larut
dalam etanol, dalam kloroform, dan dalam polietilena
glikol 400.
Baku pembanding Eritromisin BPFI; biarkan sampai
suhu ruang sebelum ampul dibuka. Higroskopik. sesudah
ampul dibuka, timbang segera dan buang sisa. Kecuali
dinyatakan lain, tidak boleh dikeringkan sebelum
dipakai . Eritromisin Etilsuksinat BPFI; tidak boleh
dikeringkan sebelum dipakai .
Identifikasi Spektrum serapan inframerah larutan
dalam kloroform P (1 dalam 100) memakai sel
1,0-mm, menampilkan maksimum hanya pada panjang
gelombang yang sama seperti pada Eritromisin
Etilsuksinat BPFI.
Sifat hablur <1091> Memenuhi syarat.
pH <1071> Antara 6,0 dan 8,5; lakukan penetapan
memakai suspensi 1% dalam air.
Air <1071> Metode I Tidak lebih dari 3,0%; lakukan
penetapan memakai 20 ml metanol P yang
mengandung 10% imidazol P sebagai pengganti
metanol P di dalam bejana titrasi.
Sisa pemijaran <301> Tidak lebih dari 1,0%; lakukan
pemijaran pada suhu 550o±50o, basahkan sisa
pengarangan dengan 2 ml asam nitrat P dan 5 tetes asam
sulfat P.
Penetapan potensi Lakukan penetapan seperti tertera
pada Penetapan Potensi Antibiotik secara Mikrobiologi
<131>, memakai beberapa zat yang ditimbang
saksama, larutkan dalam metanol P sampai kadar lebih
kurang 1 mg eritrimisin per ml. Encerkan larutan secara
kuantitastif memakai Dapar nomor 3 untuk
memperoleh larutan uji dengan kadar diperkirakan setara
dengan aras dosis tengah larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
SUSPENSI ORAL ERITROMISIN
ETILSUKSINAT
Erythromycin Ethylsuccinate Oral Suspension
Suspensi Oral Eritromisin Etilsuksinat yaitu Suspensi
Eritromisin Etilsuksinat yang mengandung satu atau
lebih dapar, pewarna, pendispersi, pengaroma dan
pengawet yang sesuai. Mengandung Eritromisin,
C37H67NO13, setara dengan tidak kurang dari 90,0% dan
tidak lebih dari 120,0%, dari jumlah yang tertera pada
etiket.
Baku pembanding Eritromisin BPFI; biarkan sampai
suhu kamar sebelum ampul dibuka. Higroskopik. sesudah
dibuka, timbang segera dan buang sisa. Kecuali
denyatakan lain, tidak boleh dikeringkan sebelum
dipakai . Eritromisin Etilsuksinat BPFI; tidak boleh
dikeringkan sebelum dipakai .
Identifikasi
Lakukan penetapan seperti tertera pada Identifikasi
secara Kromatografi Lapis Tipis <281>.
Larutan uji Tambahkan metanol P secukupnya pada
beberapa zat uji sampai kadar setara dengan lebih kurang
2,5 mg eritromisin per ml. Kocok selama lebih kurang
30 menit. Sentrifus campuran, pakailah beningan.
- 387 -
Larutan baku Larutkan Eritromisin Etilsuksinat BPFI
dalam metanol P sampai kadar lebih kurang 3 mg
per ml.
tahap gerak Campuran metanol P-kloroform P (85:15).
Penampak bercak Campuran etanol P-
p-metoksibenzaldehida P-asam sulfat P (90:5:5).
procedure Totolkan secara terpisah masing-masing
10 μl Larutan uji dan Larutan baku pada lempeng
kromatografi Silika gel P setebal 0,25 mm. Masukkan
lempeng ke dalam bejana kromatografi yang tidak
dilapisi kertas kertas dengan tahap gerak sampai
merambat lebih kurang 9 cm di atas garis penotolan.
Angkat lempeng, biarkan tahap gerak menguap, semprot
lempeng dengan Penampak bercak. Panaskan lempeng
pada 100o selama 10 menit dan amati kromatogram.
Eritromisin dan asam suksinat tampak sebagai bercak
berwarna hitam sampai lembayun: harga Rf bercak utama
yang diperoleh dari Larutan uji sesuai dengan yang
diperoleh dari Larutan baku.
Volume terpindahkan <1261> Memenuhi syarat.
Keseragaman sediaan <911> Memenuhi syarat, untuk
suspensi yang dikemas dalam wadah dosis tunggal.
pH <1071> Antara 6,5 dan 8,5.
Penetapan potensi Lakukan penetapan seperti tertera
pada Penetapan Potensi Antibiotik secara Mikrobiologi
<131>, memakai beberapa volume zat uji yang
diukur saksama yang baru dikocok dan bebas gelembung
udara , lumatkan selama 4±1 menit dalam blender kaca
kecepatan tinggi dengan metanol P secukupnya sampai
diperoleh larutan persediaan yang mengandung setara
dengan lebih kurang 1mg eritromisin per ml. Encerkan
larutan persediaan ini secara kuantitatif dengan Dapar
nomor 3 sampai diperoleh larutan uji yang memiliki
kadar diperkirakan setara dengan aras dosis tengah
larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat,
di tempat dingin.
TABLET ERITROMISIN ETILSUKSINAT
Erythromycin Ethylsuccinate Tablet
Tablet Eritromisin Etilsuksinat mengandung Eritromisin
Etilsuksinat, C37H67NO13, setara dengan tidak kurang
dari 90,0% dan tidak lebih dari 120,0%, dari jumlah
yang tertera pada etiket.
Baku pembanding Eritromisin BPFI; biarkan sampai
suhu kamar sebelum ampul dibuka. Higroskopik. sesudah
ampul dibuka, timbang segera dan buang sisa. Kecuali
dinyatakan lain, tidak boleh dikeringkan sebelum
dipakai . Eritromisin Etilsuksinat BPFI; tidak boleh
dikeringkan sebelum dipakai .
Identifikasi Serbukkan beberapa tablet, tambahkan
metanol P secukupnya sampai diperoleh larutan yang
mengandung setara dengan lebih kurang 2,5 mg
eritromisin per ml. Kocok selama lebih kurang
30 menit. Sentrifus campuran, dan pakailah beningan
yang jernih sebagai larutan uji. Lakukan seperti tertera
pada Identifikasi dalam Suspensi Oral Eritromisin
Etilsuksinat, mulai dengan “Larutan baku”
Disolusi <1231>
Media: 900 ml asam klorida 0,1 N.
Alat tipe 2: 50 rpm.
Waktu: 45 menit.
procedure Lakukan penetapan jumlah C37H67NO13
yang terlarut, dengan mengukur serapan alikuot, jika
perlu encerkan dengan asam klorida 0,1 N, dan serapan
larutan baku Eritromisin BPFI dalam media yang sama.
Toleransi Dalam waktu 45 menit harus larut tidak
kurang dari 75% (Q) C37H67NO13, dari jumlah yang
tertera pada etiket.
Keseragaman sediaan <911> Memenuhi syarat.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 4,0%;
lakukan pengeringan pada tekanan tidak lebih dari
5 mmHg pada suhu 60o selama 3 jam, memakai
lebih kurang 100 mg. [Catatan Tablet kunyah
dibebaskan dari persyaratan ini.]
Air <1031>Metode I Tidak lebih dari 5,0% [Hanya
untuk tablet kunyah.]
Penetapan potensi Lakukan penetapan seperti tertera
pada Penetapan Potensi Antibiotik secara Mikrobiologi
<131>, memakai tidak kurang dari 4 tablet,
lumatkan selama 4±1 menit dalam blender kaca
kecepatan tinggi dengan metanol P secukupnya yang
diukur saksama sampai diperoleh larutan persediaan
mengandung eritromisin setera tidak lebih dari 5 mg
per ml. Encerkan larutan persediaan ini secara kuantitatif
dengan Dapar nomor 3 sampai diperoleh larutan uji yang
memiliki kadar diperkirakan setara dengan aras dosis
tengah larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
ERITROMISIN ETILSUKSINAT UNTUK
SUSPENSI ORAL
Eryhtromycin Ethylsuccinate for Oral Suspension
Eritromisin Etilsuksinat untuk Suspensi Oral yaitu
campuran kering Eritromisin Etilsuksinat dengan satu
atau lebih dapar; pewarna, pengencer, pendispersi dan
pengaroma yang sesuai. Mengandung Eritromisin,
C37H67NO13, tidak kurang dari 90,0% dan tidak lebih
dari 120,0% dari jumlah yang tertera pada etiket.
- 388 -
Baku pembanding Eritromisin BPFI; biarkan sampai
suhu kamar sebelum ampul dibuka. Higroskopik. sesudah
ampul dibuka, timbang segera dan buang sisa. Kecuali
dinyatakan lain, tidak boleh dikeringkan sebelum
dipakai . Eritromisin Etilsuksinat BPFI; tidak boleh
dikeringkan sebelum dipakai .
Identifikasi Pada beberapa zat uji tambahkan metanol P
secukupnya sampai kadar lebih kurang 2,5 mg
eritromisin per ml, dan aduk selama 30 menit. Sentrifus
campuran dan pakailah beningan yang jernih sebagai
larutan uji. Lakukan seperti tertera pada Identifikasi
dalam Suspensi Oral Eritromisin Etilsuksinat, mulai
dengan “Larutan baku”.
Volume terpindahkan <1261> Memenuhi syarat.
Keseragaman sediaan <911> Memenuhi syarat, untuk zat
padat yang dikemas dalam wadah takaran tunggal.
pH <1071> Antara 7,0 dan 9,0; lakukan penetapan
memakai suspensi yang disiapkan seperti tertera
pada etiket.
Susu pengeringan <1121> Tidak lebih dari 1,0%;
lakukan pengeringan dalam botol bersumbat kapiler
dalam hampa udara pada suhu 60o selama 3 jam,
memakai lebih kurang 100 mg.
Penetapan potensi Lakukan penetapan seperti tertera
pada Penetapan potensi dalam Suspensi Oral
Eritromisin Etilsuksinat, memakai zat uji yang
dikonstitusi seperti tertera pada etiket.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
ERITROMISIN STEARAT
Erythromycin Stearate
H
O
O
CH3
CH3 H OH
H H3C H3C
CH3H
O
H
HH
HO
H
OCH2CH3
H3C
HO
O
CH3
OH
CH3
OCH3
O
O
OH
CH3
N(CH3)2
Eritromisin stearat (garam) [643-22-1]
C37H67NO13.C18H36O2 BM 1018,42
Eritromisin Stearat yaitu garam asam stearat dari
eritromisin, dengan asam stearat berlebih. memiliki
potensi setara dengan tidak kurang dari 550 μg
eritromisin, C37H67NO13.C18H36O2, per mg, dihitung
terhadap zat anhidrat.
Pemerian Serbuk atau hablur, putih agak kuning; tidak
berbau atau sedikit berbau tanah; dan rasa agak pahit.
Kelarutan Praktis tidak larut dalam air; larut dalam
etanol, dalam kloroform, dalam metanol, dan dalam eter.
Baku pembanding Eritromisin BPFI; biarkan sampai
suhu kamar sebelum ampul dibuka. Higroskopik. sesudah
ampul dibuka, timbang segera dan buang sisa. Kecuali
dinyatakan lain, tidak boleh dikeringkan sebelum
dipakai . Eritromisin Stearat BPFI; tidak boleh
dikeringkan sebelum dipakai .
Identifikasi Spektrum serapan inframerah zat yang
didispersikan dalam minyak mineral P menampilkan
maksimum hanya pada bilangan gelombang yang sama
seperti pada Eritromisin Stearat BPFI.
Sifat hablur <1091> Memenuhi syarat.
pH <1071> Antara 6,0 dan 11,0; lakukan penetapan
memakai suspensi 1% dalam air.
Air <1031> Metode I Tidak lebih dari 4,0%; lakukan
penetapan memakai 20 ml metanol P mengandung
10% imidazol P sebagai pengganti dalam labu titrasi.
Sisa pemijaran <301> Tidak lebih dari 1,0%; sisa
pengarangan dibasahkan dengan 2 ml asam nitrat P dan
5 tetes asam sulfat P.
Penetapan potensi Lakukan seperti tertera pada
Penetapan potensi dalam Eritromisin Etilsuksinat.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
TABLET ERITROMISIN STEARAT
Erythromycin Stearate Tablet
Tablet Eritromisin Stearat mengandung Eritromisin,
C37H67NO13, setara dengan tidak kurang dari 90,0% dan
tidak lebih dari 120,0% dari jumlah yang tertera pada
etiket.
Baku pembanding Eritromisin BPFI; biarkan sampai
suhu kamar sebelum ampul dibuka. Higroskopik. sesudah
dibuka, timbang segera dan buang sisa. Kecuali dinyatakan
lain, tidak boleh dikeringkan sebelum dipakai .
Eritromisin Stearat BPFI; tidak boleh dikeringkan
sebelum dipakai .
Identifikasi
Lakukan penetapan seperti tertera pada Identifikasi
secara Kromatografi Lapis Tipis <281>.
Larutan uji Pada beberapa serbuk tablet tambahkan
metanol P secukupnya sampai diperoleh larutan yang
setara dengan lebih kurang 5 mg eritromisin per ml.
Kocok selama 30 menit; sentrifus campuran, pakailah
beningan.
Larutan baku Timbang saksama beberapa Eritromisin
- 389 -
BPFI dan larutan dalam metanol P sampai kadar lebih
kurang 8 mg per ml.
tahap gerak Campuran metanol P-kloroform P (85:15).
Penampak bercak 1 Larutan 2’,7’-diklorofluoresen P
dalam metanol P (1 dalam 500).
Penampak bercak 2 Campuran etanol P- p-
metoksibenzaldehida P-asam sulfat P (90:5:5)
procedure Totolkan secara terpisah masing-masing
20 μl Larutan uji dan Larutan baku pada lempeng
kromatografi Silika gel P setebal 0,25 mm dan biarkan
kering. Masukkan lempeng ke dalam bejana yang tidak
dilapisi kertas, dengan tahap gerak, biarkan merambat
lebih kurang 9 cm. Angkat lempeng, biarkan menguap.
Semprot lempeng dengan Penampak bercak 1 dan amati
di bawah cahaya ultraviolet pada panjang gelombang
366 nm: harga Rf dari bercak utama Larutan uji sesuai
dengan harga Rf dari Larutan baku. Semprot lempeng
dengan Penampak bercak 2, panaskan pada suhu 100o
selama 10 menit dan amati kromatogram, eritromisin
tampak sebagai bercak ungu sampai hitam: harga Rf
bercak utama Larutan uji sesuai dengan Larutan baku.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 5,0%;
lakukan pengeringan dalam botol bersumbat kapiler
dalam hampa udara pada suhu 60o selama 3 jam
memakai lebih kurang 100 mg serbuk tablet.
Disolusi <1231>
Media: 900 ml dapar fosfat 0,05 M pH 6,8.
Alat tipe 2: 100 rpm.
Waktu: 120 menit.
Larutan baku persediaan Timbang saksama beberapa
Eritromisin BPFI, larutkan dalam metanol P sampai kadar
lebih kurang 14 mg per ml. Encerkan secara kuantitatif
dengan air sampai kadar lebih kurang 0,56 mg per ml.
Larutan baku Pada hari dipakai , encerkan 25,0 ml
Larutan baku persediaan dengan air sampai 50,0 ml.
Larutan uji sesudah 120 menit, ambil sebagian filtrat
hasil disolusi, saring, dan jika perlu encerkan dengan
Media disolusi sampai kadar lebih kurang 0,28 mg
eritromisin per ml.
procedure Pipet masing-masing 5 ml, Larutan baku ke
dalam labu tentukur 25-ml, satu labu tentukur dipakai
sebagai blangko larutan baku. Dengan cara yang sama,
pipet masing-masing 5 ml Larutan uji ke dalam 2 labu
tentukur 25-ml, satu labu tentukur dipakai sebagai
blangko larutan uji. Ke dalam labu yang dipakai
sebagai blangko, tambahkan 2,0 ml asam sulfat 0,5 N
dan ke dalam labu yang lain tambahkan 2,0 ml air.
Biarkan selama 5 menit sambil sekali-kali digoyang. Ke
dalam semua labu tambahkan masing-masing 15,0 ml
natrium hidroksida 0,25 N, encerkan dengan Media
disolusi sampai tanda. Panaskan labu di dalam tangas air
pada suhu 60o±0,5o selama 5 menit, dan biarkan menjadi
dingin. Ukur serapan masing-masing larutan pada
panjang gelombang serapan maksimum lebih kurang
236 nm terhadap masing-masing larutan blangko. Hitung
jumlah C37H67NO13 yang terlarut.
Toleransi Dalam waktu 120 menit harus larut tidak
kurang dari 75% (Q) C37H67NO13, dari jumlah yang
tertera pada etiket.
Keseragaman sediaan <911> Memenuhi syarat.
Penetapan potensi Masukkan tidak kurang dari 4 tablet
dalam blender berkecepatan tinggi berisi 200 ml metanol P
dan campur selama 3 menit. Tambahkan 300 ml Dapar
nomor 3 dan campur selama 3 menit. Lakukan
penetapan seperti tertera pada Penetapan potensi
Antibiotik secara Mikrobiologi <131> memakai
beberapa volume larutan yang diukur saksama, encerkan
bertahap dengan Dapar nomor 3 sampai diperoleh
larutan uji dengan kadar yang diperkirakan sama dengan
aras dosis tengah larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
ESTRADIOL
Estradiol
CH3
H
HH
HO
OH
H
Estra-1,3,5(10)-triena-3,17ß-diol [50-28-2]
C18H24O2` BM 272,39
Estradiol mengandung tidak kurang dari 97,0% dan tidak
lebih dari 103,0% C18H24O2, dihitung terhadap zat
anhidrat.
Pemerian Hablur kecil atau serbuk hablur; putih atau
putih-krem; tidak berbau; stabil di udara; higroskopis.
Kelarutan Praktis tidak larut dalam air; larut dalam
etanol, dalam aseton, dalam dioksan, dalam kloroform
dan dalam larutan alkali hidroksida tertentu; agak sukar
larut dalam minyak nabati.
Baku pembanding Estradiol BPFI; tidak boleh
dikeringkan; lakukan Penetapan Kadar Air <1031>
Metode I sebelum dipakai . Estron BPFI.
Identifikasi
A. Spektrum serapan inframerah zat yang dikeringkan
dan didispersikan dalam minyak mineral P menampilkan
maksimum hanya pada bilangan gelombang yang sama
seperti pada Estradiol BPFI.
B. Spektrum serapan ultraviolet larutan (1 dalam
20.000) dalam metanol P menampilkan maksimum dan
minimum pada panjang gelombang yang sama seperti
pada Estradiol BPFI; daya serap masing-masing
dihitung terhadap zat anhidrat pada panjang gelombang
serapan maksimum lebih kurang 280 nm berbeda tidak
lebih 3,0%.
- 390 -
Jarak lebur <1021>Metode I Antara 173o dan 179o.
Rotasi Jenis <1081> Antara +76º dan +83º, dihitung
terhadap zat anhidrat; lakukan penetapan memakai
larutan dalam dioksan P yang mengandung 100 mg zat
per 10 ml.
Air <1031> Metode I Tidak lebih dari 3,5%.
Penetapan kadar Lakukan penetapan dengan cara
Kromatografi cair kinerja tinggi seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
tahap gerak Buat campuran asetonitril P-air (55:45)
saring dan awaudarakan, jika perlu lakukan penyesuaian
menurut Kesesuaian sistem seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
Larutan baku internal Timbang lebih kurang 300 mg
etilparaben P, masukkan ke dalam labu tertukur 500-ml,
tambahkan metanol P sampai tanda.
Larutan baku Timbang saksama beberapa Estradiol
BPFI dan Estron BPFI, larutkan dalam metanol P
sampai kadar berturut-turut 0,40 mg dan 0,24 mg per ml.
Pipet 10 ml larutan ini dan 5 ml Larutan baku internal,
masukkan ke dalam labu tentukur 200-ml. Tambahkan
100 ml metanol P, encerkan dengan air sampai tanda,
sampai diperoleh larutan yang mengandung lebih kurang
20 μg Estradiol BPFI per ml.
Larutan uji Timbang saksama lebih kurang 100 mg
zat, masukkan ke dalam labu tentukur 250-ml,
tambahkan metanol P sampai tanda. Pipet 10 ml larutan
ini dan 5 ml Larutan baku internal, masukkan ke dalam
labu tentukur 200-ml, tambahkan 100 ml metanol P,
encerkan dengan air sampai tanda.
Sistem kromatografi Lakukan seperti tertera pada
Kromatografi <931>. Kromatograf cair kinerja tinggi
dilengkapi dengan detektor 205 nm dan kolom 30 cm x
3,9 mm berisi bahan pengisi L1. Laju alir lebih kurang
1 ml per menit. Lakukan kromatografi terhadap Larutan
baku, rekam kromatogram dan ukur respons puncak
seperti tertera pada procedure : resolusi, R, antara puncak
analit dan puncak estron, tidak kurang dari 2,0 dan
simpangan baku relatif pada penyuntikan ulang tidak
lebih dari 2,0%.
procedure Suntikkan secara terpisah beberapa volume
sama (lebih kurang 25 μl) Larutan baku dan Larutan uji
ke dalam kromatograf, ukur respons puncak utama.
Waktu retensi relatif Larutan baku internal, estron dan
estradiol berturut-turut lebih kurang 0,7; 1,3 dan 1,0.
Hitung jumlah dalam mg estradiol, C18H24O2, dengan
rumus:
Sr
r
C5 U
C yaitu kadar Estradiol BPFI dalam μg per ml Larutan
baku; rU dan rS berturut-turut yaitu perbandingan respons
puncak dari Larutan uji dan Larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat,
tidak tembus cahaya.
ESTRADIOL BENZOAT
Estradiol Benzoate
CH3
H
HH
PhCO.O
OH
H
-Estradiol-3-benzoat [50-50-0]
C25H28O3 BM 376,50
Estradiol Benzoat mengandung tidak kurang dari 97,0%
dan tidak lebih dari 103,0% C25H28O3, dihitung terhadap
zat yang telah dikeringkan.
Pemerian Hablur tidak berwarna atau serbuk hablur
putih atau hampir putih.
Kelarutan Praktis tidak larut dalam air; sukar larut
dalam etanol dan dalam minyak lemak; larut dalam
aseton.
Baku pembanding Estradiol Benzoat BPFI.
Identifikasi Uji A dapat diabaikan jika uji B, C, D telah
dilakukan. Uji C dan D dapat diabaikan jika uji A dan B
dilakukan.
A. Spektrum serapan inframerah zat yang telah
dikeringkan dan didispersikan dalam kalium bromida P
menampilkan maksimum hanya pada bilangan
gelombang yang sama seperti pada Estradiol Benzoat
BPFI. Jika spektrum yang diperoleh tidak sesuai, ulangi
pengujian memakai larutan 5% dalam kloroform P.
B. Pada uji Senyawa sejenis jika diamati dengan
cahaya ultraviolet 365 nm, bercak utama Enceran
larutan uji I sesuai dengan Larutan baku.
C. Pada 1 mg zat tambahkan 0,5 ml larutan ammonium
molibdat P 5% dalam asam sulfat P: terjadi warna hijau
kekuningan yang berfluoresensi hijau jika diamati
dibawah cahaya ultraviolet 365 nm. Tambahkan 1 ml
asam sulfat P dan 9 ml air: larutan menjadi merah muda
dengan fluoresensi kekuningan.
D. Titik lebur <1021> Metode I 191° sampai 198°.
Rotasi jenis <1081> +57° sampai +63°; lakukan
penetapan memakai larutan 1% dalam 1,4-dioksan P.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 0,5%;
lakukan pengeringan pada suhu 100° - 105o selama
3 jam, memakai 500 mg zat.
Sisa pemijaran <301> Metode I Tidak lebih dari 0,2%;
lakukan penetapan memakai 500 mg zat.
- 391 -
Senyawa sejenis Lakukan Kromatografi lapis tipis
seperti tertera pada Kromatografi <931>.
tahap gerak Campuran toluen P-etanol P (90:10)
Larutan uji Timbang saksama beberapa zat, larutkan
dalam campuran kloroform P-metanol P (9:1) sampai
kadar 2,0%.
Enceran larutan uji I Encerkan Larutan uji dengan
pelarut yang sama sampai kadar 0,1%.
Enceran larutan uji II Enceran Larutan uji dengan
pelarut yang sama sampai kadar 0,020%.
Larutan baku Timbang saksama beberapa Estradiol
Benzoat BPFI, larutan dalam campuran kloroform P-
metanol P (9:1) sampai kadar 0,1%.
procedure Totolkan secara terpisah masing-masing
5 μl Larutan uji, Enceran larutan uji I, Enceran
larutan uji II dan Larutan baku pada lempeng
kromatografi Silika gel G. Masukkan lempeng ke dalam
bejana kromatografi yang telah dijenuhkan dengan tahap
gerak. Angkat lempeng, biarkan tahap gerak menguap,
panaskan pada suhu 110° selama 10 menit, semprot
dengan asam sulfat etanol LP 20%, panaskan lagi pada
suhu 110º selama 10 menit dan amati di bawah cahaya
ultraviolet 365 nm. Bercak lain selain bercak utama
Larutan uji tidak lebih intensif dari bercak Enceran
larutan uji II.
Penetapan kadar Timbang saksama lebih kurang 25 mg
zat, masukkan ke dalam labu tentukur 250-ml, larutkan
dan encerkan dengan etanol P sampai tanda. Pipet 10 ml
larutan ini ke dalam labu tentukur 100-ml, tambahkan
etanol P sampai tanda. Ukur serapan pada panjang
gelombang serapan maksimum lebih kurang 231 nm.
Hitung jumlah dalam mg estradiol benzoat, C25H28O3;
serapan jenis pada panjang gelombang serapan
maksimum lebih kurang 231 nm yaitu 500.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup baik
dan terlindung cahaya.
ESTRADIOL SIPIONAT
Estradiol Cypionate
Estradiol 17-siklopentanapropionat [313-06-4]
C26H36O3 BM 396,57
Estradiol Sipionat mengandung tidak kurang dari 97,0%
dan tidak lebih dari 103,0% C26H36O3, dihitung terhadap
zat yang dikeringkan.
Pemerian Serbuk hablur; putih sampai praktis putih;
tidak berbau atau agak berbau.
Kelarutan Tidak larut dalam air; larut dalam etanol,
dalam aseton, dalam kloroform dan dalam dioksan; agak
sukar larut dalam minyak nabati.
Baku pembanding Estradiol Sipionat BPFI; lakukan
pengeringan pada suhu 105° selama 4 jam sebelum
dipakai .
Identifikasi
A. Spektrum serapan inframerah zat yang telah
dikeringkan dan didispersikan dalam kalium bromida P
menampilkan maksimum hanya pada bilangan
gelombang yang sama seperti pada Estradiol Sipionat
BPFI.
B. Spektrum serapan ultraviolet larutan (1 dalam
10.000) dalam etanol P, menampilkan maksimum dan
minimum pada panjang gelombang yang sama seperti
pada Estradiol Sipionat BPFI; daya serap masing-
masing, dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan
pada panjang gelombang serapan maksimum lebih
kurang 280 nm berbeda tidak lebih dari 3,0%.
Jarak lebur <1021> Antara 149o dan 153o.
Rotasi jenis <1081> Antara +39o dan +44o, dihitung
terhadap zat yang telah dikeringkan; lakukan penetapan
memakai larutan dalam dioksan P yang
mengandung 200 mg zat per 10 ml.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 1,0%;
lakukan pengeringan pada suhu 105º selama 4 jam.
Sisa pemijaran <301> Tidak lebih dari 0,2%.
Penetapan kadar Lakukan penetapan dengan cara
Kromatografi cair kinerja tinggi seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
tahap gerak Larutkan 800 mg amonium nitrat P dalam
300 ml air, tambahkan 700 ml asetonitril P, campur.
Larutan baku internal Timbang beberapa testosteron
benzoat, larutkan dalam tetrahidrofuran P sampai kadar
2,0 mg per ml.
Larutan baku Timbang saksama lebih kurang 10 mg
Estradiol Sipionat BPFI, masukkan ke dalam labu
tentukur 10-ml. Tambahkan Larutan baku internal
sampai tanda, kocok kuat-kuat sampai larut.
Larutan uji Timbang saksama lebih kurang 10 mg zat,
masukkan ke dalam labu tentukur 10-ml. Tambahkan
Larutan baku internal sampai tanda, kocok kuat-kuat
sampai larut.
procedure Suntikkan secara terpisah masing-masing
lebih kurang 10 μl Larutan uji dan Larutan baku ke
dalam kromatograf yang dilengkapi dengan detektor
280 nm dan kolom 30 cm x 4 mm berisi bahan pengisi
L1, lakukan penetapan pada suhu kamar. tahap gerak
dipertahankan pada tekanan dan laju alir yang dapat
memberi resolusi, R, yang dikehendaki dan waktu
eluasi yang sesuai. Pada sistem yang sesuai, faktor
resolusi antara puncak estradiol sipionat dan baku
internal tidak kurang dari 3,0. Pada lima kali
penyuntikan Larutan baku menampilkan simpangan
baku relatif tidak lebih dari 1,5. Hitung jumlah dalam
mg estradiol sipionat, C26H36O3, dengan rumus:
- 392 -
S
U
r
r
C10
C yaitu kadar Estradiol Sipionat BPFI dalam mg per
ml Larutan baku; rU dan rS berturut-turut yaitu
perbandingan respons puncak estradiol sipionat dan
puncak baku internal dalam Larutan uji dan Larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat,
tidak tembus cahaya.
ESTRIOL
Estriol
CH3
H
HH
HO
OH
H
H
OH
Estriol [50-27-1]
C18H24O3 BM 288,39
Estriol mengandung tidak kurang dari 97,0% dan tidak
lebih dari 102,0% C18H24O3, dihitung terhadap zat yang
telah dikeringkan.
Pemerian Serbuk hablur, putih sampai praktis putih;
tidak berbau; melebur pada suhu lebih kurang 280º.
Kelarutan Tidak larut dalam air; agak sukar larut dalam
etanol; larut dalam aseton, dalam kloroform, dalam
dioksan dan dalam eter.
Baku pembanding Estriol BPFI; lakukan pengeringan
pada suhu 105o selama 3 jam sebelum dipakai .
Kesempurnaan melarut Larutkan 500 mg dalam 10 ml
piridin P: larutan jernih dan tidak ada padatan yang tidak
larut.
Identifikasi
A. Spektrum serapan inframerah zat yang telah
dikeringkan dan didispersikan dalam kalium bromida P
menampilkan maksimum hanya pada bilangan
gelombang yang sama seperti pada Estriol BPFI.
B. Spektrum serapan ultraviolet larutan (1 dalam
10.000) dalam etanol P, menampilkan maksimum dan
minimum pada panjang gelombang yang sama seperti
pada Estriol BPFI.
Rotasi jenis <1081> Antara +54o dan +62o, dihitung
terhadap zat yang telah dikeringkan; lakukan penetapan
memakai larutan dalam dioksan P yang
mengandung 40 mg zat per 10 ml.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 0,5%;
lakukan pengeringan pada suhu 105o selama 3 jam.
Sisa pemijaran <301> Tidak lebih dari 0,1%.
Cemaran secara kromatografi Tidak lebih dari 2,0%.
Lakukan Kromatografi lapis tipis seperti tertera pada
Kromatografi <931>.
tahap gerak Campuran kloroform P-metanol P-aseton
P-asam asetat P (90:5:5:5).
Larutan uji Timbang saksama beberapa zat, larutkan
dalam campuran dioksan P-air (9:1) sampai kadar
20,0 mg per ml.
Larutan baku Timbang saksama beberapa Estriol
BPFI, larutkan dalam campuran dioksan P-air (9:1)
sampai kadar 20,0 mg per ml.
Enceran larutan baku Buat satu seri pengenceran
Larutan baku dalam campuran dioksan P-air (9:1)
sampai kadar 0,40; 0,20; 0,10 dan 0,05 mg per ml.
procedure Totolkan secara terpisah masing-masing
5 μl Larutan uji, Larutan baku dan Enceran larutan
baku pada lempeng kromatografi silika gel. Masukkan
ke dalam bejana kromatografi yang telah dijenuhkan
dengan 200 ml tahap gerak selama 15 menit, tutup bejana
dan biarkan merambat sampai 15 cm di atas garis
penotolan. Angkat lempeng, biarkan menguap. Semprot
lempeng dengan campuran metanol P-asam sulfat P
(7:3) lalu panaskan pada suhu 100° selama
15 menit. Harga Rf bercak utama Larutan uji sesuai
dengan bercak utama Larutan baku. Bandingkan bercak
lain selain bercak utama, dengan bercak Enceran larutan
baku. Bercak yang diperoleh dari 0,40; 0,20; 0,10 dan
0,05 mg per ml enceran larutan baku berturut-turut
setara dengan 2,0%; 1,0%; 0,5% dan 0,25% cemaran.
Penetapan kadar
Larutan baku Timbang saksama beberapa Estriol
BPFI; lakukan seperti tertera pada Larutan uji sampai
kadar 50 μg per ml.
Larutan uji Timbang saksama lebih kurang 50 mg zat,
masukkan ke dalam labu tentukur 100-ml, larutkan dan
encerkan dengan etanol P sampai tanda. Pipet 10,0 ml
larutan ini ke dalam labu tentukur 100-ml, encerkan
dengan etanol P sampai tanda.
procedure Ukur serapan Larutan uji dan Larutan baku
pada panjang gelombang serapan maksimum lebih
kurang 281 nm. Hitung jumlah dalam mg estriol,
C18H24O3, dengan rumus:
S
U
A
A
C
C yaitu kadar Estriol BPFI dalam μg per ml Larutan
baku; Au dan As berturut-turut yaitu serapan Larutan
uji dan Larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
- 393 -
ESTROGEN TERKONJUGASI
Conjugated Estrogen
Estrogen Terkonjugasi yaitu campuran Natrium Estron
Sulfat dan Natrium Ekuilin Sulfat, diperoleh seluruh
bagian atau sebagian dari urin ekuin atau dibuat secara
sintesa dari estron dan ekuilin. Mengandung zat
estrogenik terkonjugasi lain dari tipe yang berasal dari
kuda betina hamil, merupakan dispersi zat estrogenik
tidak kurang dari 52,5% dan tidak lebih dari 61,5%
natrium estron sulfat dan tidak kurang dari 22,5% dan
tidak lebih dari 30,5% natrium ekuilin sulfat dan total
natrium estron sulfat tidak kurang dari 79,5% dari
jumlah yang tertera pada etiket. Estrogen Terkonjugasi
juga mengandung komponen bersamaan sebagai natrium
sulfat terkonjugasi dari tidak kurang dari 13,5% dan
tidak lebih dari 19,5% 17 -dihidroekuilin, tidak kurang
dari 2,5% dan tidak lebih dari 9,5% 17 -estradiol dan
tidak kurang dari 0,5% dan tidak lebih dari 4,0% 17 -
dihidroekuilin dari jumlah yang tertera pada etiket.
Pemerian Estrogen terkonjugasi berasal dari sumber
alam, berupa serbuk amorf; kekuningan; tidak berbau
atau berbau khas lemah. Bentuk sintetis berupa hablur
atau serbuk amorf; putih sampai sedikit kekuningan
terang; tidak berbau atau sedikit barbau.
Baku pembanding Estron BPFI; lakukan pengeringan
pada suhu 105° selama 3 jam sebelum dipakai .
Ekuilin BPFI; tidak boleh dikeringkan sebelum
dipakai . Simpan dalam wadah tertutup rapat di tempat
sejuk. 17 -Dihidroekuilin BPFI; tidak boleh dikeringkan
sebelum dipakai . Simpan di tempat dingin, terlindung
cahaya. Simpan isi ampul yang telah dibuka dalam
wadah tertutup rapat, berisi gas nitrogen, di tempat
dingin, terlindung dari cahaya. Estradiol BPFI; tidak
boleh dikeringkan, lakukan Penetapan Kadar Air
<1031> Metode I sebelum dipakai .
Identifikasi Hasil berikut diperoleh memakai
Larutan uji seperti tertera pada procedure dalam
Penetapan kadar.
A. Waktu retensi relatif puncak estron dan ekuilin
sama seperti pada Larutan baku.
B. Pada kromatogram estrogen terkonjugasi, puncak
17 -dihidroekuilin menampilkan waktu retensi relatif
seperti yang ditunjukkan kromatogram Larutan baku.
Puncak lain atau berupa bahu menampilkan 17 -
estradiol dan 17ß-dihidroekuilin dengan waktu retensi
relatif terhadap 3-O-metilestron berturut-turut lebih
kurang 0,24 dan 0,35.
Komponen bersamaan Lakukan penetapan seperti
tertera pada Penetapan kadar. Waktu retensi relatif
puncak 17 -dihidroekuilin, 17 -dihidroekuilin dan
17 -estradiol pada kromatogram Larutan uji berturut-
turut yaitu 0,35, 0,30 dan 0,24. Hitung jumlah relatif
dalam mg, 17 -dihidroekuilin, 17 -dihidroekuilin, dan
17 -estradiol relatif terhadap perbandingan luas puncak,
RS, 17 -dihidroekuilin yang diperoleh dari Larutan
baku.
Tanda cemaran Tidak lebih dari 6,5%
17 -dihidroekuilenin, tidak lebih dari 5,5%
17 -dihidroekuilenin dan tidak lebih dari 11,0%
ekuilenin. Lakukan penetapan seperti tertera pada
Penetapan kadar. Waktu retensi relatif 17 -
dihidroekuilenin, 17 -dihidroekuilenin dan ekuilenin
pada kromatogram Larutan uji berturut-turut yaitu
0,56, 0,64 dan 1,3. Hitung persentase tanda cemaran
relatif masing-masing terhadap luas puncak estron yang
diperoleh dari Larutan uji.
Batas 17 -estradiol dan 8,9-dehidroestron Tidak
lebih dari 4,5% 17 -estradiol dan tidak lebih dari 12,5%
8,9-dehidroestron. Lakukan penetapan seperti tertera
pada Penetapan kadar. Hitung persentase relatif
17 -estradiol dan 8,9-dehidroestron terhadap luas
puncak estron yang diperoleh dari Larutan uji.
Steroid bebas Tidak lebih dari 1,3%; lakukan penetapan
seperti tertera pada Penetapan kadar, namun tanpa
penambahan enzim sulfatase. pakailah 6,0 ml sebagai
pengganti 3,0 ml filtrat pada pembuatan Larutan uji dan
buat Larutan baku steroid bebas dengan mengencerkan
Larutan baku persediaan sepuluh kali. Pada tidak
kurang dari dua kali penyuntikan ulang, simpangan baku
relatif perbandingan luas puncak estron Larutan baku
steroid bebas, RS, tidak lebih dari 5,5%. Buat blangko
dengan cara yang sama. Hitung luas puncak gabungan
estron, ekuilin dan 17 -dihidroekuilenin dan
perbandingan luas puncak gabungan (RfS) terhadap luas
puncak 3-O-metilestron, koreksi untuk tiap puncak larutan
blangko.
Perbandingan
S
fS
R
R
tidak lebih dari 0,65.
Cemaran senyawa organik mudah menguap <471>
Metode V Memenuhi syarat.
Pelarut pakailah dimetil sulfoksida P.
Penetapan kadar Lakukan penetapan dengan cara
Kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi
<931>.
Larutan baku internal Timbang saksama beberapa
3-O-metilestron, larutkan dalam metanol P sampai kadar
lebih kurang 150 μg per ml.
Larutan baku persediaan Timbang saksama beberapa
Estron BPFI, Ekuilin BPFI dan 17 -Dihidroekuilin
BPFI, larutkan dan encerkan secara kuantitatif dan
bertahap dalam etanol P sampai kadar berturut-turut
lebih kurang 160 μg, 70 μg dan 50 μg per ml.
Dapar asetat pH 5,2 Campur 79 ml natrium asetat LP
dan 21 ml asam asetat 1 N, encerkan dengan air sampai
500 ml. Atur pH sampai 5,2±0,1 dengan penambahan
asam asetat 1 N atau natrium asetat LP.
- 394 -
Larutan kesesuaian sistem Timbang beberapa
Estradiol BPFI (17 -estradiol), larutkan dalam etanol P
sampai kadar lebih kurang 2 μg per ml. Pipet 1 ml
larutan ini, 1 ml Larutan baku persediaan dan 1 ml
Larutan baku internal ke dalam tabung sentrifuga
bertutup ulir atau bersumbat rapat. Lanjutkan menurut
cara yang tertera pada Larutan baku mulai dengan
“Uapkan campuran”.
Larutan baku Pipet 1 ml Larutan baku persediaan dan
1 ml Larutan baku internal ke dalam tabung sentrifuga
bertutup ulir atau bersumbat rapat. Uapkan campuran
ini dengan bantuan aliran gas nitrogen P pada suhu
di bawah 50º sampai kering. Pada residu kering
tambahkan 15 μl piridin P anhidrat dan 65 μl
bis(trimetilsilil)trifluoroasetamida P mengandung 1%
trimetil klorosilan. Segera tutup rapat tabung sentrifuga,
campur dan biarkan selama 15 menit. Tambahkan 0,5 ml
toluen P, campur.
Larutan uji Timbang saksama beberapa zat, setara
dengan 2 mg estrogen terkonjugasi total, masukkan ke
dalam tabung sentrifuga 50 ml dilengkapi dengan tutup
ulir politer berisi 15 ml Dapar asetat pH 5,2 dan 1 g
barium klorida P. Tutup rapat tabung sentrifuga, kocok
selama 30 menit. Jika perlu atur pH sampai 5,0±0,5 dengan
penambahan asam asetat 1 N atau natrium asetat LP.
Tempatkan pada tangas sonikator selama 30 detik,
lalu kocok lagi selama 30 menit. Tambahkan
enzim sulfatase yang sesuai setara dengan 2500 unit dan
kocok selama 20 menit dalam tangas air pada suhu 50°.
Tambahkan 15,0 ml dikloroetana P pada campuran
hangat, tutup tabung, kocok selama 15 menit. Sentrifus
selama 10 menit atau sampai lapisan bawah jernih.
Pindahkan sebanyak mungkin tahap organik dan saring
secara cepat melalui corong berisi wol kaca kering dan
lebih kurang 5 g natrium sulfat anhidrat P. Hindari
kehilangan sebab penguapan. Pipet 3 ml larutan ini,
masukkan ke dalam tabung sentrifuga dilengkapi tutup
ulir atau sumbat rapat. Tambahkan 1,0 ml Larutan baku
internal. Lanjutkan penetapan seperti tertera pada
Larutan baku, mulai dari “Uapkan campuran”.
Sistem kromatografi Lakukan penetapan memakai
cara Kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi
<931>. Kromatograf gas dilengkapi dengan detektor
ionisasi nyala dan kolom kapiler silika 15 m x 0,25 mm
dilapisi dengan tahap diam G19 setebal 0,25 m dan suatu
sistem injektor split. Pertahankan suhu injektor, detektor
dan kolom masing-masing pada 260°, 260° dan 220°.
pakailah hidrogen sebagai gas pembawa dengan laju alir
lebih kurang 2 ml per menit dan laju alir split yaitu
40 - 60 ml per menit.
procedure Suntikkan lebih kurang 1 l Larutan
kesesuaian sistem ke dalam kromatograf gas.
Kondisikan sampai waktu retensi puncak
3-O-metilestron antara 17 dan 25 menit. Waktu retensi
relatif 17 -estradiol, 17 -dihidroekuilin, estron, ekuilin
dan 8,9-dihidroestron terhadap 3-O-metilestron berturut-
turut yaitu lebih kurang 0,29; 0,30; 0,8; 0,87 dan 0,9.
Faktor ikutan puncak estron tidak lebih dari 1,3; resolusi,
R, antara puncak estron dan ekuilin tidak kurang dari
1,2; simpangan baku relatif perbandingan puncak estron
pada tidak kurang dari empat kali penyuntikan ulang
Larutan baku tidak lebih dari 2,0%. Suntikan beberapa
volume sama (lebih kurang 1 μl) Larutan baku dan
Larutan uji ke dalam kromatograf. Hitung perbandingan
luas puncak Ru dan Rs dari estron, ekuilin dan
17 -dihidroekuilin terhadap Larutan baku internal, dari
kedua Larutan uji dan Larutan baku. Hitung dalam mg
masing-masing estrogen sulfat natrium (estron dan
ekuilin) dalam Estrogen Terkonjugasi dengan rumus:
( )
S
U
i R
R
C)(381,1005,0
Ci yaitu kadar Estron BPFI, Ekuilin BPFI dan 17 -
dihidroekuilin BPFI dalam g per ml Larutan baku
persediaan; 1,381 yaitu faktor konversi estrogen bebas
ke konjugat garam natrium.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat.
TABLET ESTROGEN TERKONJUGASI
Conjugated Estrogen Tablet
Tablet Estrogen Terkonjugasi mengandung Estrogen
Terkonjugasi sebagai jumlah Natrium Estron Sulfat dan
Natrium Ekuilin Sulfat, tidak kurang dari 73,0% dan
tidak lebih dari 95,0% dari jumlah yang tertera pada
etiket. Perbandingan antara natrium ekuilin sulfat dan
natrium estron sulfat dalam tablet tidak kurang dari 0,35
dan tidak lebih dari 0,65.
Baku pembanding 17 -Dihidroekuilin BPFI; tidak
boleh dikeringkan. Simpan di tempat dingin, terlindung
dari cahaya. Simpan isi ampul yang telah dibuka dalam
wadah tertutup rapat, berisi gas nitrogen, di tempat
dingin dan terlindung cahaya. Ekuilin BPFI; tidak boleh
dikeringkan. Simpan dalam wadah tertutup rapat, di
tempat sejuk dan terlindung cahaya. Estron BPFI;
lakukan pengeringan pada suhu 105° selama 3 jam
sebelum dipakai , simpan dalam wadah tertutup rapat,
terlindung cahaya. Testosteron BPFI; lakukan pengeringan
dalam hampa udara diatas fosfor pentoksida P selama 4
jam sebelum dipakai , simpan dalam wadah tertutup
rapat.
Identifikasi Lakukan penetapan seperti tertera pada uji
Identifikasi dalam Estrogen Terkonjugasi.
Disolusi <1231> Lakukan penetapan seperti tertera pada
Sediaan Lepas Lambat.
Uji 1 (Untuk produk dengan etiket tablet 0,3 mg,
0,45 mg, dan 0,625 mg). Jika produk memenuhi uji ini,
pada etiket cantumkan memenuhi Uji Disolusi 1.
Media disolusi: 900 ml air
- 395 -
Alat tipe 2: 50 rpm
Waktu: 2, 5, dan 8 jam
Lakukan penetapan jumlah natrium estron sulfat yang
terlarut dengan cara Kromatografi cair kinerja tinggi
seperti tertera pada Kromatografi <931>.
tahap gerak Buat campuran larutan kalium fosfat
monobasa 0,025 M-asetonitril P (3:1), saring dan
awaudarakan. Jika perlu lakukan penyesuaian menurut
Kesesuaian sistem seperti tertera pada Kromatografi
<931>.
Larutan baku Masukkan 10 tablet ke dalam labu
tentukur 1000-ml, encerkan dengan air sampai tanda,
kocok kuat secara mekanik selama tidak kurang dari
3 jam dan saring. Pipet 100 ml filtrat ke dalam labu
tentukur 900-ml, encerkan dengan air sampai tanda.
Larutan uji Saring alikuot [Catatan Pilih penyaring
yang dipakai berdasarkan afinitas ikatan.]
Sistem kromatografi Lakukan seperti tertera pada
Kromatografi <931>. Kromatograf cair kinerja tinggi
dilengkapi dengan detektor 205 nm dan kolom 3,0 cm x
4,6 mm berisi bahan pengisi L1 dengan ukuran partikel
3 m. Laju alir lebih kurang 1,5 ml per menit. Lakukan
kromatografi terhadap Larutan baku, rekam
kromatogram ukur respons puncak seperti tertera pada
procedure : resolusi, R, antara puncak ekuilin sulfat dan
estron sulfat tidak kurang dari 1,5 dan simpangan baku
relatif puncak estron sulfat pada penyuntikan ulang tidak
lebih dari 1,5%; waktu retensi relatif ekuilin sulfat dan
estron sulfat berturut-turut yaitu lebih kurang 0,9 dan
1,0; puncak estron sulfat merupakan puncak utama yang
terakhir pada kromatogram [Catatan Jika ada
estron, akan tertahan dalam kolom lebih dari 50 menit
dan akan mempengaruhi kromatografi selanjutnya.]
procedure Suntikkan secara terpisah beberapa volume
sama (20 - 200 l) Larutan baku dan Larutan uji ke
dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur
respons puncak estron sulfat. Hitung persentase natrium
estron sulfat yang terlarut, dengan rumus:
S
U
r
r100
rU dan rS berturut-turut yaitu respons puncak dari
Larutan uji dan Larutan baku.
Toleransi Jumlah natrium estron sulfat yang terlarut
pada waktu tertentu sesuai dengan Tabel berikut:
Tabel
Waktu (jam) Jumlah terlarut
2 antara 19% dan 49%
5 antara 66% dan 96%
8 tidak kurang dari 80%
Uji 2 (Untuk produk dengan etiket tablet 0,9 mg). Jika
produk memenuhi uji ini, pada etiket cantumkan
memenuhi Uji Disolusi 2.
Media disolusi, Alat, Waktu, tahap gerak, Larutan
baku, Larutan uji, Sistem kromatografi, dan procedure
Lakukan seperti tertera pada Uji 1.
Toleransi Jumlah natrium estron sulfat yang terlarut
pada waktu tertentu sesuai dengan Tabel berikut:
Tabel
Waktu (jam) Jumlah terlarut
2 antara 12% dan 37%
5 antara 57% dan 85%
8 tidak kurang dari 80%
Uji 3 (Untuk produk dengan etiket tablet 1,25 mg dan
2,50 mg). Jika produk memenuhi uji ini, pada etiket
cantumkan memenuhi Uji Disolusi 3.
Media disolusi, Alat, tahap gerak, Larutan baku,
Larutan uji, Sistem kromatografi, dan procedure Lakukan
seperti tertera pada Uji 1.
Waktu: 2, 5, 8 dan 12 jam
Toleransi Jumlah natrium estron sulfat yang terlarut
pada waktu tertentu sesuai dengan Tabel berikut:
Tabel
Waktu (jam) Jumlah terlarut
2 antara 3% dan 22%
5 antara 37% dan 67%
8 antara 66% dan 96%
12 tidak kurang dari 80%
Uji 4 (Untuk produk dengan etiket tablet 1,25 mg). Jika
produk memenuhi uji ini, pada etiket cantumkan
memenuhi Uji Disolusi 4.
Media disolusi: 900 ml Dapar asetat pH 4,5
Alat tipe 2: 50 rpm dengan pencegah mengapungnya
sediaan.
Waktu: 2, 4, 8, dan 12 jam
Lakukan penetapan jumlah natrium estron sulfat yang
terlarut dengan cara Kromatografi cair kinerja tinggi
seperti tertera pada Kromatografi <931>.
tahap gerak Buat campuran larutan kalium fosfat
monobasa 0,025 M-asetonitril P (78:22), saring dan
awaudarakan. Jika perlu lakukan penyesuaian menurut
Kesesuaian sistem seperti tertera pada Kromatografi
<931>.
Larutan baku Timbang dan serbukkan 20 tablet,
tetapkan bobot rata-rata tablet. Timbang saksama
beberapa serbuk tablet setara dengan bobot rata-rata
tablet. Masukkan serbuk ke dalam labu tentukur 900-ml
dan encerkan dengan Media disolusi sampai tanda.
Kocok kuat secara mekanik selama tidak kurang dari
2 jam atau sampai terlarut sempurna. Saring larutan
melalui penyaring dengan porositas 10 m.
Larutan uji Saring alikuot melalui penyaring dengan
porositas 10 m [Catatan Pilih penyaring yang
dipakai berdasarkan afinitas ikatan.]
Sistem kromatografi Lakukan seperti tertera pada
Kromatografi <931>. Kromatograf cair kinerja tinggi
dilengkapi dengan detektor 210 nm dan kolom 5,0 cm x
3,2 mm berisi bahan pengisi L1 dengan ukuran partikel
- 396 -
5 m. Laju alir lebih kurang 0,8 ml per menit. Lakukan
kromatografi terhadap Larutan baku dan ukur respons
puncak seperti tertera pada procedure : resolusi, R, antara
puncak ekuilin sulfat dan estron sulfat tidak kurang dari
1,2; simpangan baku relatif pada penyuntikan ulang
tidak lebih dari 2,0%; waktu retensi relatif ekuilin sulfat
dan estron sulfat berturut-turut lebih kurang 0,9 dan 1,0;
puncak estron sulfat merupakan puncak utama terakhir
pada kromatogram [Catatan Jika ada estron, akan
tertahan dalam kolom lebih dari 50 menit dan akan
mempengaruhi kromatografi selanjutnya.]
procedure Suntikkan secara terpisah beberapa volume
sama (20-200 l) Larutan baku dan Larutan uji ke
dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur
respons puncak estron sulfat. Hitung persentase estron
sulfat yang terlarut, dengan rumus:
S
U
r
r100
rU dan rS berturut-turut yaitu respons puncak Larutan
uji dan Larutan baku.
Toleransi Jumlah natrium estron sulfat yang terlarut
pada waktu tertentu sesuai dengan Tabel berikut:
Tabel
Waktu (jam) Jumlah terlarut
2 antara 11% dan 31%
4 antara 43% dan 63%
8 antara 75% dan 95%
12 tidak kurang dari 87%
Uji 5 (Untuk produk dengan etiket tablet 0,3 mg,
0,45 mg dan 0,625 mg). Jika produk memenuhi uji ini,
pada etiket cantumkan memenuhi Uji Disolusi 5.
Media disolusi, Alat, tahap gerak, Larutan baku,
Larutan uji, Sistem kromatografi dan procedure Lakukan
seperti tertera pada Uji 4.
Waktu: 1, 3, dan 8 jam
Toleransi Jumlah natrium estron sulfat yang terlarut
pada waktu tertentu sesuai dengan Tabel berikut:
Tabel
Waktu (jam) Jumlah terlarut
1 antara 6% dan 26%
3 antara 48% dan 68%
8 tidak kurang dari 87%
Uji 6 (Untuk produk dengan etiket tablet 0,9 mg). Jika
produk memenuhi uji ini, pada etiket cantumkan
memenuhi Uji Disolusi 6.
Media disolusi, Alat, tahap gerak, Larutan baku,
Larutan uji, Sistem kromatografi dan procedure Lakukan
seperti tertera pada Uji 4.
Waktu: 1, 3 dan 8 jam
Toleransi Jumlah natrium estron sulfat yang terlarut
selama waktu tertentu sesuai dengan Tabel berikut:
Tabel
Waktu (jam) Jumlah terlarut
1 antara 3% dan 23%
3 antara 41% dan 61%
8 tidak kurang dari 80%
Keseragaman sediaan <911> Memenuhi syarat.
procedure keseragaman kandungan Lakukan
penetapan kadar terhadap satu per satu tablet dari
10 tablet, seperti tertera pada Penetapan kadar. Hitung
kadar rata-rata estrogen terkonjugasi, sebagai rata-rata
kadar total dari natrium estron sulfat dan natrium ekuilin
sulfat, dari 10 tablet. Penetapan memenuhi syarat jika
kadar tiap tablet tidak kurang dari 85,0% dan tidak lebih
dari 115,0% dari kadar rata-rata estrogen terkonjugasi.
Jika kadar tidak lebih dari 2 tablet berada di luar rentang
85,0% - 115,0% dari kadar rata-rata, namun tidak di luar
rentang 75,0% - 125,0%, lakukan penetapan kadar
dengan memakai 20 tablet tambahan. Penetapan
memenuhi syarat jika kadar tidak lebih dari 2 tablet dari
30 tablet yang ditetapkan kadarnya, berada di luar
rentang 85,0% - 115,0% dari kadar rata-rata, dan tidak
satupun di luar rentang 75,0% - 125,0% dari kadar rata-
rata.
Penetapan kadar Lakukan penetapan dengan cara
Kromatografi gas seperti tertera pada Kromatografi
<931>.
Larutan baku internal, Larutan baku persediaan,
Dapar asetat pH 5,2; Larutan kesesuaian sistem,
Larutan baku dan Sistem kromatografi Lakukan seperti
tertera pada Penetapan kadar dalam Estrogen
terkonjugasi.
Larutan uji Jika tablet merupakan tablet salut gula,
hilangkan warna dan salut gula dengan hati-hati
memakai air, biarkan lapisan salut dalam, dan
keringkan dengan nitrogen P. Timbang dan serbukkan
tidak kurang dari 20 tablet. Timbang saksama beberapa
serbuk tablet setara dengan lebih kurang 2 mg estrogen
terkonjugasi total, masukkan ke dalam tabung sentrifuga
50 ml bertutup ulir politef yang telah diisi dengan 15 ml
Dapar asetat pH 5,2 dan 1 g barium klorida P. Lakukan
seperti Larutan uji pada Penetapan kadar dalam
Estrogen terkonjugasi, dimulai dari “tutup rapat tabung
sentrifuga”.
procedure Suntikkan secara terpisah beberapa volume
sama (lebih kurang 1 l) Larutan baku dan Larutan uji
ke dalam kromatograf, rekam kromatogram dan ukur
respons puncak utama. Hitung secara terpisah jumlah
dalam mg natrium estron sulfat dan natrium ekuilin
sulfat, dalam serbuk tablet yang dipakai , dengan
rumus:
( )
S
U
S R
RC381,1005,0
1,381 yaitu faktor konversi estrogen bebas terhadap
garam natrium terkonjugasi; CS yaitu kadar Estron
- 397 -
BPFI atau Ekuilin BPFI dalam g per ml Larutan baku
persediaan; RU dan RS berturut-turut yaitu perbandingan
respons puncak analit yang sesuai terhadap puncak baku
internal dari Larutan uji dan Larutan baku.
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup baik.
Penandaan Tertera kandungan tablet dan Uji Disolusi
yang dipakai .
ETAKRIDIN LAKTAT
Rivanol
Ethacridine Lactate
N
H2N
NH2
OC2H5
CO2H
CH(OH).H2O
CH3
2-(Etoksi-6,9-diaminoakridina)monolaktat monohidrat
[1837-57-6]
C18H21N3O4H2O BM 361,41
Etakridin Laktat mengandung tidak kurang dari 99,0%
C18H21N3O4H2O.
Pemerian Serbuk hablur; kuning; tidak berbau; rasa
sepat dan pahit. Larutan dalam air bereaksi netral, jika
diencerkan berfluororesensi hijau.
Kelarutan Agak sukar larut dalam air; mudah larut
dalam air panas; sukar larut dalam etanol.
Identifikasi
A. Pada 5 ml larutan 2% zat, tambahkan 2 tetes
larutan natrium nitrit P 10% dam 2 tetes asam klorida
encer P: terjadi warna coklat merah tua.
B. Pada 5 ml larutan 2% zat, tambahkan 1 ml natrium
hidroksida 2 N: terbentuk endapan kuning.
C. Pada 5 ml larutan 0,1% zat, tambahkan 3 tetes
iodum LP: terbentuk endapan hijau biru tua, jika
ditambahkan etanol P larut.
Jarak lebur <1021> Lebih kurang 245°, disertai
peruraian.
Klorida <361> Memenuhi syarat; lakukan penetapan
memakai 50 ml filtrat yang dibuat sebagai berikut:
Larutkan 1,0 g dalam 7 ml asam nitrat encer P dan air
secukupnya sampai 100,0 ml, goyangkan, saring.
Bandingkan opalesensi dengan 0,35 ml asam klorida
0,01 N yang diperlakukan sama.
Sulfat Larutkan 500 mg zat dalam 20 ml air yang
mengandung 5 ml asam klorida encer P, goyangkan,
saring. Pada filtrat, tambahkan 3 tetes barium
klorida LP: tidak terjadi kekeruhan.
Asam lemak mudah menguap Larutkan 500 mg zat
dalam 20 ml air yang mengandung 5 ml asam sulfat
encer P, campur, saring, panaskan filtrat: tidak terjadi
bau asam lemak mudah menguap.
Amonia Larutkan 500 mg zat dalam 20 ml air mendidih,
tambahkan 0,5 ml natrium hidroksida 2 N, saring,
didihkan filtrat: tidak terjadi gas yang dapat mengubah
warna kertas lakmus merah P.
Air <1031> Metode I Antara 4,5% dan 5,5%.
Sisa pemijaran <301> Tidak lebih dari 0,25%.
Logam berat Lakukan penetapan sebagai berikut:
Larutkan 500 mg zat dalam 20 ml air mendidih,
tambahkan 3 tetes asam asetat P dan 3 tetes natrium
sulfida LP: tidak terjadi perubahan warna.
Penetapan kadar Timbang saksama lebih kurang
300 mg zat, masukkan ke dalam labu tentukur 100-ml,
tambahkan 25 ml air, 20 ml natrium asetat LP dan 1,25 ml
asam klorida 2 N sampai larut. Tambahkan 50,0 ml kalium
bikromat 0,1 N LV dan air secukupnya sampai tanda.
Biarkan selama 1 jam sambil sesekali digoyang, saring,
buang 20 ml filtrat pertama. Masukkan 50,0 ml filtrat ke
dalam labu iodum, tambahkan 30 ml asam klorida 2 N
lalu 6 ml kalium iodida LP, tutup segera, biarkan
selama 5 menit dalam gelap. Tambahkan 50 ml air, titrasi
dengan natrium tiosulfat 0,1 N LV memakai indikator
3 ml kanji LP. Lakukan penetapan blangko.
Tiap ml kalium bikromat 0,1 N
setara dengan 12,047 mg C18H21N3O4H2O
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup rapat
dan terlindung cahaya.
ETAMBUTOL HIDROKLORIDA
Ethambutol Hydrochloride
CH3CH2 C NHCH2CH2NH
CH2OH
H
C CH2CH3
H
CH2OH
2HCl
(+)-2,2’-(Etilenadiimino)-di-1-butanol dihidroklorida
[1070-11-7]
C10H24N2O2.2HCl BM 277,23
Etambutol Hidroklorida mengandung tidak kurang dari
98,0% dan tidak lebih dari 100,5% C10H24N2O2.2HCl,
dihitung terhadap zat yang telah dikeringkan.
Pemerian Serbuk hablur; putih.
Kelarutan Mudah larut dalam air; larut dalam etanol
dan dalam metanol; sukar larut dalam eter dan dalam
kloroform.
- 398 -
Baku pembanding Aminobutanol BPFI; higroskopik,
sesudah ampul dibuka, simpan dalam wadah tertutup
rapat. Tidak boleh dikeringkan; lakukan penetapan kadar
air secara titrimetri pada saat akan dipakai . Etambutol
Hidroklorida BPFI; lakukan pengeringan pada suhu
105° selama 2 jam sebelum dipakai .
Identifikasi
A. Spektrum serapan inframerah zat yang telah
dikeringkan dan didispersikan dalam kalium bromida P,
menampilkan maksimum hanya pada bilangan
gelombang yang sama seperti pada Etambutol
Hidroklorida BPFI.
B. Larutan (1 dalam 10) menampilkan reaksi Klorida
cara A, B dan C seperti tertera pada Uji Identifikasi
Umum <291>.
Rotasi jenis <1021> Antara +6,0° dan +6,7°, dihitung
terhadap zat yang telah dikeringkan; lakukan penetapan
memakai larutan 10%.
Susut pengeringan <1121> Tidak lebih dari 0,5%;
lakukan pengeringan pada suhu 105o selama 2 jam.
Logam berat <371> Metode III Tidak lebih dari 20 bpj.
Aminobutanol Tidak lebih dari 1,0%; lakukan
penetapan sebagai berikut:
Dapar borat 0,2 M Larutkan 1,24 g asam borat P
dalam 90 ml air dengan diaduk, atur pH sampai 9,0
dengan larutan natrium hidroksida P 20%. Pindahkan ke
dalam labu tentukur 100-ml, encerkan dengan air sampai
tanda.
Larutan baku Timbang saksama lebih kurang 50 mg
Aminobutanol BPFI, larutkan dengan air dalam labu
tentukur 100-ml, encerkan dengan air sampai tanda.
Pipet 1 ml larutan ke dalam labu tentukur 100-ml,
encerkan dengan air sampai tanda.
Larutan fluoreskamina Larutkan 5 mg fluoreskamina P
dalam 50 ml aseton P dalam gelas ukur bersumbat kaca.
Larutan uji Timbang saksama lebih kurang 50 mg zat,
masukkan ke dalam labu tentukur 100-ml, encerkan
dengan air sampai tanda.
procedure Pipet 10 ml Larutan uji ke dalam labu
Erlenmeyer 100 ml bersumbat kaca, tambahkan 10 ml
air dan 20 ml Dapar borat 0,2 M. Pada labu lain,
masukkan 10,0 ml Larutan uji, 10,0 ml Larutan baku
dan 20 ml Dapar borat 0,2 M. Letakkan labu di atas
pengaduk magnetik, tambahkan 10 ml Larutan
fluoreskamina dengan cepat sambil diaduk, tutup labu
dan kocok sebentar. sesudah tepat 1 menit, ukur intensitas
fluoresensi relatif kedua larutan pada panjang
gelombang lebih kurang 485 nm, dan panjang
gelombang eksitasi lebih kurang 385 nm. Intensitas
fluoresensi larutan yang diperoleh dari Larutan uji tidak
lebih besar dari perbedaan intensitas kedua larutan.
Cemaran umum <481>
Larutan uji pakailah pelarut metanol P.
Larutan baku pakailah pelarut metanol P.
tahap gerak Campuran metanol P dan amonium
hidroksida P (18:1).
Penampak bercak pakailah teknik penampak bercak
nomor 16.
Cemaran senyawa oraganik mudah menguap <471>
Metode I Memenuhi syarat.
Penetapan kadar Timbang saksama lebih kurang
200 mg zat, larutkan dalam campuran 100 ml asam
asetat glasial P dan 5 ml raksa(II) asetat LP,
tambahkan kristal violet LP dan titrasi dengan asam
perklorat 0,1 N LV, sampai warna biru menjadi biru
hijau. Lakukan penetapan blangko.
Tiap ml asam perklorat 0,1 N
setara dengan 13,86 mg C10H24N2O2.2HCl
Wadah dan penyimpanan Dalam wadah tertutup baik.
TABLET ETAMBUTOL HIDROKLORIDA
Ethambutol Hydrochloride Tablet
Tablet Etambutol Hidroklorida mengandung Etambutol
Hidroklorida, C10H24N2O2.2HCl, tidak kurang dari
95,0% dan tidak lebih dari 105,0% dari jumlah yang
tertera pada etiket.
Baku pembanding Aminobutanol BPFI; higroskopis
sesud
.jpg)
